Цель работы: провести санитарно-бактериологическую оценку состояния продуктов питания.
Задачи
1. Определить общее микробное число некоторых пищевых продуктов.
2. Определить наличие БГКП (бактерии группы кишечной палочки).
Материалы и оборудование. Чашки Петри с МПА, чашки Петри со средой Эндо, пипетки на 1 мл, ступки с пестиками, скальпели, пробирки с 9 мл стерильной воды, пробирки со средой Кесслера, стерильные колбы с 100 мл воды, весы.
Основные понятия. Специфическая микрофлора пищевых продуктов, неспецифическая микрофлора пищевых продуктов, БГКП, санитарно-показательные микроорганизмы.
Ход работы:
Задание 1. Определить наличие БГКП и общую обсемененность продуктов питания, выполняя последовательно следующие этапы:
1. Подготовка пищевых продуктов к исследованию.
Растирают в стерильной фарфоровой ступке 10 г навески (берут стерильно из разных мест), постепенно добавляя 90 мл изотонического раствора хлорида натрия, и оставляют при комнатной температуре на несколько минут. Затем стерильной пипеткой с широким носиком отбивают взвесь для посевов и разведений (1 мл). Принимается, что 1 мл приготовленной взвеси содержит 0,1 г исходного продукта (разведение 10–1). Продукты жидкой консистенции засевают и разводят для посевов без предварительной подготовки.
2. Приготовление разведений пищевых продуктов для посева.
Для продуктов жидкой консистенции разведения готовят следующим образом: отбирают стерильной пипеткой 1 мл продукта и вносят в пробирку, содержащую 9 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия, перемешивают. Полученное разведение (10–2) подвергают таким же образом дальнейшему разведению в необходимое количество раз (кратное 10).
3. Определение общей обсемененности.
Выбранные для посева разведения вносят по 1 мл в стерильные чашки Петри с расплавленным при 45–500 МПА, после чего их перемешивают. Среде дают застыть, посевы выращивают в течение суток при температуре плюс 37 °С, после чего подсчитывают число выросших колоний (КОЕ). Определяют общее количество бактерий в 1 мл или 1 г продукта.
4. Определение наличия БГКП.
Для посева используется то количество продукта, в котором в соответствии с установленными нормами предусматривается отсутствие БГКП. Из выбранных разведений исследуемых образцов продуктов берут по 1 мл и засевают в пробирки со средой Кесслера. Засеянные пробирки инкубируют при плюс 37 0С 24 ч. При отсутствии признаков роста (газообразования или изменения цвета среды) делают заключение о соответствии исследуемого продукта нормативу. При наличии признаков роста производят высев на среду Эндо. Посевы инкубируют 18–20 ч при 37 0С. При просмотре посевов отмечают колонии, подозрительные или типичные для БГКП (образуют красные, розовые, бледнорозовые колонии с металлическим блеском или без него). Из них делают препараты живых и фиксированных клеток, окрашивают по Граму, микроскопируют. Обнаружение грамотрицательных, не образующих спор палочек с закругленными концами, свидетельствует о возможном наличии БГКП.
Заключается в посеве исследуемого материала в конденсационную воду скошенного мясопептонного агара. При размножении подвижные формы микроорганизмов из конденсационной воды распространяются на агаре, как бы вползая на его поверхность.
Данные по общей обсемененности и наличию кишечной палочки вносят в таблицу 7.
Таблица 7 – Некоторые санитарно-бактериологические нормативы (СанПиН 2.3.2.560-96)
Контрольные вопросы
1. Микрофлора пищевых продуктов (кисло-молочных, рыбы, мяса, колбасных изделий, консервов).
2. Характеристика групп микроорганизмов, используемых при оценке безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов.
3. Методы санитарно-бактериологического исследования пищевых продуктов.